Kalibracija spektrofotometra je proces u kojem se znanstveni instrument poznat kao spektrofotometar kalibrira kako bi se potvrdilo da radi ispravno. To je važno jer osigurava da su mjerenja dobivena instrumentom točna. Postupak se neznatno razlikuje za različite instrumente, a većina proizvođača daje detaljan vodič za kalibraciju u korisničkom priručniku kako bi ljudi znali kako pravilno kalibrirati opremu. Kada se ovaj proces izvodi, osoba koja to radi mora napraviti bilješku u dnevniku priloženom opremi iu svojim eksperimentalnim bilješkama, kako bi ljudi znali kada je uređaj zadnji put kalibriran i rukovao ga je i tko.
Spektrofotometar je sposoban i za prijenos i za primanje svjetlosti. Uređaj se koristi za analizu uzoraka ispitnog materijala propuštanjem svjetlosti kroz uzorak i očitavanjem intenziteta valnih duljina. Različiti uzorci utječu na svjetlost na različite načine, omogućujući istraživaču ili tehničaru da sazna više o materijalima u ispitnom uzorku gledajući kako se svjetlost ponaša dok prolazi kroz uzorak. Kalibracija spektrofotometra je neophodna kako bi se potvrdilo da su rezultati točni.
U kalibraciji spektrofotometra, referentna otopina se koristi za nuliranje opreme. Ovo rješenje pruža osnovno ili nulto očitanje. Uređaj se kalibrira postavljanjem referentne otopine unutar spektrofotometra, nuliranjem postavki i pokretanjem instrumenta. Zatim se uzorci stvarnog ispitnog materijala mogu podvrgnuti spektrofotometriji s pouzdanjem da je stroj kalibriran i da radi ispravno.
U spektrofotometru s jednom snopom generira se jedan snop svjetlosti, a uređaj se mora ponovno kalibrirati za svaku upotrebu. U spektrofotometru s dvostrukom snopom, zrake se mogu slati kroz ispitni uzorak i referentni uzorak u isto vrijeme kako bi se generirale dva skupa rezultata koji se mogu koristiti za referencu i kalibraciju. U oba slučaja, kalibraciju spektrofotometra može obaviti u laboratoriju netko tko radi sa strojem. Ako se na stroju pojave ozbiljni problemi, može se poslati proizvođaču na održavanje, popravak i potencijalnu zamjenu.
Kako bi spektrofotometar ispravno radio, prije upotrebe mora se pustiti da se zagrije. Mnogim uređajima potrebno je oko 10 minuta za zagrijavanje. Važno je izbjegavati obavljanje kalibracije spektrofotometra tijekom faze zagrijavanja jer će to poništiti postavke. Također je važno biti svjestan da za određene vrste valnih duljina mogu biti potrebni posebni filteri i priključci kako bi uređaj funkcionirao.