Što je Zimografija?

Zimografija je tehnika koju izvode biokemičari u kojoj se čestice raspršuju pomoću električnog naboja u procesu poznatom kao elektroforeza. Konkretno, proces koristi supstrat u kojem će enzim reagirati polimerizacijom s polikrilamidnim gelom, otopinom na bazi vode napravljenom od toksičnih materijala. Ovaj zimogramski gel poznat je kao poliakrilamidni gel natrijevog dodecil sulfata (SDS-PAGE).

Biokemičar koji provodi zimografiju pripremit će gel za zimogram metodom elektroforeze. Obično se ova metoda radi zajedno s kuhanjem ili redukcijom gela. Međutim, u zimografiji, SDS-PAGE gel ostaje netaknut. Nakon ovog koraka, SDS dio spoja se uklanja korištenjem materijala poznatog kao Triton X-100™, oksidacijskog deterdženta tvrtke BASF™. Ovaj materijal se drži na 98°F (oko 37°C) dulje vrijeme u naprednom inkubatoru. Biokemičar će tada obojati preostali materijal pomoću crnog ili plavog spoja. To omogućuje istraživaču da identificira gdje i kako dolazi do probave pomoću enzima u tvari.

Dok je SDS-PAGE gel najčešće korištena tvar u zimografiji, druge vrste materijala mogu se koristiti za identifikaciju brzine probave i sposobnosti enzima. Mnogo puta to uključuje dodavanje škrobnog filma kako bi se olakšao proces vizualne identifikacije.

Biokemičari i biomedicinski inženjeri obično koriste ovaj proces u nastojanju da nauče o novim oblicima enzima. Definiranjem brzine probave i obrazaca kretanja enzima mogu se identificirati različita svojstva ljudskih i životinjskih proteina. Ovo se koristi za određena genetska istraživanja i analize, kao i za primjenu lijekova i lijekova.

Postupkom zimografije mora se postupati pažljivo. Iako se to uglavnom može učiniti uz minimalne sigurnosne mjere, svaki znanstvenik ili istraživač koji rukuje materijalima mora biti siguran da izbjegava fizički kontakt. I deterdžent Triton X-100™ i SDS-PAGE gel mogu biti vrlo toksični za kožu.

Postoji niz enzima koji na ovaj proces ne reagiraju kako se očekuje. Na primjer, probavne glikozidaze D. melanogaster mogu preživjeti procese redukcije u drugim vrstama probavnog pregleda. Osim toga, preživjet će proces zagrijavanja sve do 122°F (oko 50°C), znatno iznad razine potrebne u tradicionalnom zimografskom procesu. Kada enzim preživi proces bez potpunog probavljanja SDS-PAGE gela, povećana rezolucija trake se vidi u završnim fazama. To može uzrokovati probleme s dobivanjem točnih rezultata iz procesa zimografije.