Što je fluorescentni spektrofotometar?

Fluorescencijski spektrofotometar, također poznat kao fluorimetar, znanstveni je instrument koji se koristi u fluorescentnoj spektroskopiji za određivanje spektra fluorescencije uzorka. Taj se spektar zatim analizira kako bi se osigurala ili potvrdila identifikacija sastava uzorka. Fluorescencijski spektrofotometar se često može naći u kemijskim, biokemijskim i medicinskim laboratorijima kao pomoć u analizi organskih spojeva.

Fluorescencijska spektroskopija je proučavanje fluorescencije uzorka. Kada se određeni spojevi propuštaju kroz svjetlo, u ovom slučaju ultraljubičasto (UV) svjetlo, emitiraju zračenje niske razine, koje se često otkriva kao vidljivo svjetlo. Rezultirajuća fluorescencija sadrži različite valne duljine i, stoga, promatranje spektra njezine emisije i ekscitacije može se koristiti za identifikaciju elemenata unutar spoja.

Fluorescencijski spektrofotometar tradicionalno sadrži monokromator s difrakcijskom rešetkom ili filtar koji djeluje kao difrakcijska rešetka. Monokromatori su znanstveni instrumenti koji omogućuju korisniku odabir određene valne duljine svjetlosti pomoću difrakcijske rešetke. Nakon što je odabrana valna duljina pobude, ona se fokusira na uzorak, pobuđujući molekule unutar njega da fluoresciraju. Detektor se postavlja pod kutom od 90° u odnosu na pobudno svjetlo kako ne bi kontaminirao rezultat uzbudnim svjetlom. Rezultat je emisijski spektar.

Mnoge vrste fluorescentnih spektrofotometara mogu snimiti i spektar fluorescencije i spektar ekscitacije. Spektri uzbude rezultat su zadržavanja valne duljine emisije na određenoj vrijednosti, umjesto konstantne valne duljine pobuđivanja. Taj se spektar zatim propušta kroz mnogo različitih valnih duljina i rezultati se bilježe za kasniju analizu. Intenzitet fluorescencije proporcionalan je apsorpciji svjetlosti u uzorak, što čini dvije vrste spektra identičnima.

Jedan primjer upotrebe fluorescentnog spektrofotometra je proučavanje sastava fluorescencije škorpiona pod UV svjetlom. Nije poznato zašto škorpioni fluoresciraju pod ultraljubičastim zračenjem, a ovo je jedno područje biološkog proučavanja koje ostaje bez odgovora. Znanstvenici u Kaliforniji su pokazali da ova fluorescencija može pomoći škorpionu u prepoznavanju i otkrivanju UV svjetla.

Nemojte brkati fluorescenciju s fosforescencijom. Fluorescentni materijal ispušta zračenje pod UV svjetlom kao rezultat apsorpcije fotona koji pobuđuje elektrone u materijalu. Kada se svjetlost oduzme, materijal više ne svijetli. Fosforescentni materijali pohranjuju svjetlost i zatim je postupno oslobađaju. To je razlog zašto objekti koji svijetle u mraku nastavljaju svijetliti, čak i kada su svjetla ugašena.