Što je SYBR Green®?

SYBR Green® je fluorescentna boja koja se s velikom specifičnošću veže na dvolančanu DNK. Široko se koristi u istraživanju molekularne biologije za kvantificiranje i vizualizaciju dvolančane DNK. SYBR Green® je sintetička boja koju je početkom 1990-ih predstavila Molecular Probes®, Inc., podružnica Invitrogen&trade Corporation. To je asimetrična cijaninska boja, a cijanini su obitelj sintetskih organskih boja koje se koriste u fotografiji, CD-R i DVD-R medijima, te u različitim istraživačkim aplikacijama molekularne biologije.

Nekoliko značajki čini SYBR Green® posebno korisnim kao nukleinsku kiselinu. Stabilan je u rasponu temperatura, što znači da se može koristiti za praćenje biokemijskih reakcija koje se odvijaju na visokim i niskim temperaturama. Veže se nekovalentno na površinu DNA, što znači da neće ometati aktivnost većine nukleaza i DNA polimeraza. Također se veže na nukleinske kiseline u dinamičkom linearnom rasponu do četiri reda veličine, tako da može dati točnu kvantifikaciju DNK u širokom rasponu koncentracija.

Najčešća laboratorijska upotreba SYBR Green® je otkrivanje dvolančane DNA u lančanoj reakciji polimeraze (PCR) u stvarnom vremenu i u akrilamidnim gelovima. PCR je tehnika za umnožavanje nekoliko kopija DNA kroz ponovljene cikluse replikacije DNA. PCR u stvarnom vremenu mjeri amplifikaciju kako se odvija, a budući da se SYBR Green® veže na dvolančanu DNA, mjerenje emisije fluorescencije kompleksa DNA-boja omogućuje istraživaču da kvantificira količinu proizvedene DNK. Kako PCR ciklusi napreduju, dolazi do povećanja fluorescencije proporcionalno količini proizvedenog PCR produkta.

Akrilamidni gelovi su sveprisutni u laboratorijima molekularne biologije, jer služe uobičajeno potrebnoj svrsi razdvajanja fragmenata DNK po veličini. SYBR Green® omogućuje istraživaču da vizualizira DNK u akrilamidnom gelu osvjetljavajući ga svjetlom odgovarajuće valne duljine. Ostale upotrebe SYBR Green® uključuju detekciju nukleinskih kiselina u otopini, u aplikacijama za biočip i u protočnoj citometriji. Kompleks DNA-boja apsorbira plavo svjetlo na 488 nm i emitira zeleno svjetlo na 522 nm.

SYBR Green® je vrlo osjetljiv; 25 puta je osjetljiviji od etidijevog bromida, druge boje koja se često koristi za vizualizaciju DNK. Visok afinitet SYBR Green® za dvolančanu DNK čini ga korisnim za otkrivanje uzoraka DNK s malim brojem kopija. Poželjno veže dvolančanu DNA, ali također može vezati jednolančanu DNA sa smanjenom fluorescencijom. Kao i svaka molekula koja veže DNA, SYBR Green® može uzrokovati mutacije i mogući je kancerogen. Međutim, sigurnije je raditi i lakše se odlagati od etidijevog bromida.