U području genetike, dihibridno križanje je križanje dvaju organizama, u kojem se ispituju geni za dvije osobine. Točnije, oba su organizma heterozigotna za obje osobine, što znači da nose i dominantne i recesivne gene za tu osobinu. Zbog toga je dominantni gen izražen kod oba roditelja, ali sedam od 16 potomaka pokazat će barem jednu recesivnu osobinu.
Ekspresirani gen je onaj koji se nalazi u organizmu. Najjednostavniji primjer je vidljiva osobina, poput boje očiju ili kose. U osnovnom obliku genske ekspresije, pojedinac nosi dva gena za svaku osobinu, ali se samo jedan gen ekspresira, odnosno pojavljuje.
Za svaku osobinu postoje dominantni i recesivni geni. Dominantni gen je onaj koji je uvijek izražen, dok se recesivni gen izražava samo ako su oba gena koja organizam nosi za to svojstvo recesivna. Dakle, pojedinac s dva dominantna gena ili dominantnim i recesivnim genom će izraziti dominantni gen. Drugim riječima, recesivni gen će biti izražen samo ako organizam nosi dva recesivna gena.
Genetika je vrlo složena znanost, ali mnoga genetska predviđanja, uključujući ona za dihibridno križanje, mogu se pojednostaviti korištenjem alata koji se zove Punnettov kvadrat. Ovo je mreža postavljena s mogućim kombinacijama gena jednog roditelja koji su navedeni na vrhu, i mogućim kombinacijama gena za drugog roditelja navedenim dolje s jedne strane. Mrežni kvadrati se koriste za izračunavanje svih mogućih kombinacija gena koje bi se mogle proizvesti križanjem dvaju roditeljskih organizama. To može omogućiti korisniku da izračuna vjerojatnost da će potomci imati bilo koju zadanu osobinu ili kombinaciju osobina.
Boja dlake i očiju pasa može se koristiti kao primjer dihibridnog križanja. U ovom primjeru dominantna boja kose je crna i predstavljena je sa H, dok je recesivna boja kose bijela i predstavljena je sa h. Dominantna boja očiju je smeđa, predstavljena sa E, a recesivna boja očiju je plava, predstavljena sa e. Budući da su oba roditelja heterozigotna u dihibridnom križanju, oba imaju skup gena predstavljenih HhEe. To znači da su moguće kombinacije gena svakog roditelja navedene na Punnettovom kvadratu HE, He, hE i he.
Da nastavimo, četiri moguće kombinacije gena za boju kose mogu se proizvesti križanjem ovog skupa roditelja — HH, Hh, hH i hh. Po istoj logici, moguće kombinacije gena za boju očiju su EE, Ee, eE i ee. Budući da postoje četiri moguće kombinacije za svaku vrstu gena, ukupan broj mogućih kombinacija gena je 16.
Od 16 mogućih kombinacija, devet teorijskih potomaka posjedovat će dominantan gen za obje osobine i stoga će imati crnu kosu i smeđe oči, kao i roditeljski psi. Samo jedan od 16 pasa proizvedenih ovim križanjem imao bi i recesivne osobine bijele dlake i plavih očiju. Preostalih šest potomaka pokazat će po jednu dominantnu i jednu recesivnu osobinu, tako da bi tri psa imala crnu dlaku i plave oči, dok bi tri imala bijelu kosu i smeđe oči.