Zahtjevi za životno ili zdravstveno osiguranje često uključuju test za otkrivanje nikotina. Plinska tekućinska kromatografija može otkriti nikotin — ili njegov primarni metabolit, kotinin — u uzorcima mokraće, krvi, sline i kose. Mjerenje kotinina u urinu smatra se najosjetljivijom tehnikom detekcije nikotina. Niti jedan od ovih testova neće savršeno razlikovati aktivne pušače, pasivne ili rabljene pušače i nepušače, jer individualne razlike u metabolizmu nikotina uvelike variraju. Međutim, testiranje detekcije nikotina dat će dobru procjenu ukupne izloženosti nikotinu.
Nikotin je kemikalija koja izaziva ovisnost koja se nalazi u cigaretama i duhanu za žvakanje. Žvakanje ili udisanje duhana unosi nikotin u tijelo, gdje se metabolizira u jetri i izlučuje mokraćom. Primarni metabolit nikotina je kotin, a kotin je primarna metoda detekcije nikotina, jer ima poluživot i do 10 puta duži od nikotina. Drugim riječima, stabilan je u tijelu mnogo dulje. U slučajevima sumnje na predoziranje nikotinom, kao što je kada dijete pojede nikotinsku žvaku, mjeri se nikotin umjesto kotinina.
Otkrivanje nikotina korištenjem uzoraka kose rijetko je izvan eksperimentalnih testova, jer je skupo. Međutim, testiranje kose može procijeniti dugotrajnu upotrebu duhana, jer može otkriti izloženost nikotinu do 10 dana prije uzimanja uzorka. Nikotinski testovi u slini su jednostavni i neinvazivni; pljuvačka se apsorbira iz usta pomoću krpice za uzorak ili štapića, ali može biti teško dobiti dovoljno velik uzorak. Djeca ili odrasli sa suhim ustima možda neće proizvesti dovoljno sline za uzorak za testiranje. Testovi sline također se oslanjaju na vrlo nedavno izlaganje nikotinu i možda neće uspjeti razlikovati lagane aktivne pušače od pasivnih pušača.
Uzorci krvi omogućuju otkrivanje kotinina u krvnoj plazmi, iako uzorak krvi zahtijeva mnogo više obrade nego uzorci urina ili sline. Uzorak krvi se najprije centrifugira kako bi se krvne stanice odvojile od plazme, a teški proteini se zatim precipitiraju. Epruveta se centrifugira drugi put i zatim se stavi u isparivač kako bi se uklonila preostala tekućina; suhi proteini, uključujući kotinin, otapaju se korištenjem metilnog alkohola. Još jednom, epruveta se centrifugira kako bi se odvojili svi preostali teški proteini, a tekućina se izlije i koristi za analizu. Ovaj proces je dugotrajniji i skuplji od testova urina ili sline.
Detekcija nikotina pomoću urina vrlo je osjetljiva i otkrit će čak i male razine pasivnog dima. To je najčešća metoda koju osiguravajuća društva koriste za razlikovanje aktivnih pušača od pasivnih pušača. Bez obzira na to je li otkrivanje nikotina putem urina, sline ili krvnog seruma, razlika se može vidjeti između ljudi koji aktivno puše tri ili više cigareta dnevno i onih s visokom razinom pasivnog pušenja. Teški pušači se također mogu razlikovati od lakih pušača po količini kotinina u uzorku.