Nikotin se može otkriti različitim testovima koji mjere razinu kemikalije zvane kotinin. Tijelo proizvodi kotinin samo kada nikotin uđe u tijelo, kao što je korištenje cigareta, duhana za lulu, burmuta, cigara ili duhana za žvakanje. Kotinin se može otkriti ispitivanjem krvi, kose, sline ili urina osobe. Rezultati testova mogu pokazati je li osoba trenutni ili bivši korisnik duhana.
Postoje razni razlozi zašto se testiranje na nikotin može provesti. Roditelji ponekad koriste testove kako bi utvrdili jesu li njihova djeca pušila. Davatelji zdravstvenog osiguranja nekih tvrtki zahtijevaju testiranje na nikotin kako bi procijenili zdravstvene rizike potencijalnog zaposlenika. Testiranje se također može koristiti u programima za prestanak pušenja, u slučajevima skrbništva nad djecom, kada se osoba prijavljuje za životno osiguranje ili u istraživačke svrhe.
Test urina je uobičajena metoda za ispitivanje nikotina. Razina kotinina u mokraći mjeri se korištenjem test trake ili stavljanjem nekoliko kapi urina na test disk. Urin koji sadrži kotinin reagira s materijalima za ispitivanje kako bi pokazao pozitivan ili negativan rezultat. Kućni setovi za testiranje na droge lako su dostupni u ljekarnama ili putem interneta za one koji žele privatno testirati nikotin. Test urina na nikotin vrijedi oko četiri dana nakon što je osoba zadnji put upotrijebila duhan.
Procjena sline za ispitivanje nikotina je proces sličan testu urina. Za ovu procjenu, uzorak sline stavlja se na test traku i daje rezultate za otprilike pola sata. Iako test nikotinske sline daje dosljedne i točne rezultate, mogao bi pokazati pozitivno očitanje od izlaganja pasivnom pušenju. Roditelji ponekad koriste setove za kućno testiranje sline kako bi utvrdili jesu li njihova djeca pušila.
Analiza krvi za testiranje na nikotin nije tako pouzdana kao testovi urina ili sline. Kada osoba koristi duhan, razina nikotina u krvi raste gotovo odmah i ostaje prisutna više od dva tjedna. Razina nikotina prikazana u krvi može varirati ovisno o metabolizmu pojedinca, vrsti duhana koji se koristi i koliko se duboko udiše dim. Neki poslodavci preferiraju analizu krvi jer mogu provjeriti ima li u isto vrijeme nikotina i ilegalnih droga.
Kotinin može ostati u folikulima dlake do godinu dana nakon što je osoba prestala koristiti duhan. Ispitivanje nikotina s uzorcima kose je skupo i rijetko ga koriste osiguravajuća društva ili poslodavci. Općenito je ograničeno na istraživanja koja mjere učinke pasivnog pušenja na nepušače. Za ovu vrstu testa prikladna je kosa s bilo kojeg dijela tijela.