Postupak ELISA započinje u ambulanti, uzimanjem uzorka krvi od pacijenta. Zatim se slijedi niz koraka pomoću ELISA testnog kompleta u laboratoriju. Test će otkriti prisutnost antitijela ili antigena na bolest, kao što je HIV, u krvi. Koraci uključuju dodavanje raznih tvari i pranje, a rezultati se općenito mjere promjenom boje.
Enzimski imunoesej (ELISA), koji se također naziva i imunoenzimski test (EIA), koristi se kao dijagnostički test. Najpoznatiji je kao dijagnostički test za HIV. Test ploča se obično sastoji od 96 malih jažica u koje je imobiliziran specifični antigen. Ako je protutijelo prisutno u uzorku seruma, ono će se vezati za antigen, omogućujući detekciju putem različitih koraka ELISA postupka.
Prvi korak u ELISA postupku je uzimanje uzorka od pacijenta. To radi medicinska sestra, u sterilnim uvjetima. Krv se obično uzima iz vene na ruci ili šaci. Na ruku se stavlja podvez kako bi se vena otekla i olakšao zahvat te se čisti koža na mjestu gdje će se ubadati igla. Može se osjetiti mali ubod dok igla ulazi, a krv će se skupljati u sterilnu epruvetu.
Nakon uzimanja uzorka krvi se prenosi u laboratorij gdje će ostatak ELISA postupka obaviti laboratorijski tehničar. Uzorak krvi se prvo dodaje u jažice ELISA ploče. Ako je prisutno specifično antitijelo, ono se veže za antigen. Ploča se zatim ispere puferom kako bi se uklonila nevezana antitijela.
Zatim se dodaje drugo protutijelo, obično životinjskog podrijetla, koje ima enzim koji je vezan za njega, koje će se vezati na kompleks antitijelo-antigen. Ploča se ponovno ispere, kako bi se uklonio višak. Enzim reagira na boju kada se na kraju ELISA postupka doda supstrat. Mjerenje stupnja promjene boje daje rezultat.
Postupak ELISA-e potrebno je pažljivo slijediti kako bi se izbjegli lažni rezultati. U većinu ELISA ploča uključena je pozitivna i negativna kontrola, kako bi se takvi lažni rezultati sveli na najmanju moguću mjeru. Prilikom testiranja na HIV, pozitivan rezultat obično će biti praćen drugim, potvrdnim testom, često drugačijeg tipa, kao što je Western Blot.