Što je ekstrakcija RNA?

Ekstrakcija ribonukleinske kiseline (RNA) je laboratorijski proces koji se obično koristi u molekularno biološkim istraživanjima. Izoliranjem lanaca RNA, istraživači mogu proučavati genetske komponente raznih organizama, od bakterija do ljudi. Iako je deoksiribonukleinska kiselina (DNA) najčešća nukleinska kiselina povezana s genetskim istraživanjima, RNA je veza između DNK i proteina stanice odgovorna za različite strukturne uloge. Ekstrakcija RNA omogućuje znanstvenicima proučavanje puta od informacija o DNK do proizvodnje proteina i funkcije stanica.

Nukleinske kiseline, u obliku DNA i RNA, drže genetske informacije potrebne za funkcioniranje i replikaciju stanica. Ribonukleinska kiselina, ili RNA, je veza između DNK i staničnih proteina. Specifični tipovi RNA kopiraju specifične dijelove DNK kako bi pomogli u stvaranju takvih proteina. Praćenje puta između DNK i staničnih proteina pomaže istraživačima razumjeti regulaciju gena i sintezu proteina unutar pojedinačnih stanica. Procesi koji olakšavaju ekstrakciju RNA i osiguravaju stabilnost uzorka daju istraživačima sredstva za praćenje puta između DNK i RNA.

Tijekom ekstrakcije RNA biološki uzorci se reduciraju i pročišćavaju do te mjere da se RNA izolira za kasnije ispitivanje. Molekularne komponente, kao što su proteini, RNA i DNA, dijele se ili izoliraju u različito vrijeme, omogućujući ekstrakciju specifičnih vrsta RNA. Različite vrste tkiva i stanica zahtijevaju različite metode ekstrakcije RNK. Dok postoje različite metode za izvođenje RNA ekstrakcije, najčešća se koristi centrifugiranjem za miješanje bioloških uzoraka s različitim kemijskim spojevima, poznatim zajedno kao denaturanti.

Jedna uobičajena metoda ekstrakcije RNA je ekstrakcija fenolom-kloroformom, također poznata kao PC ili PCIA. Ovom metodom uzorci tkiva se miješaju s jednakim dijelovima fenola i kloroforma. Poznata kao dvofazna smjesa, otopina se centrifugira u denaturirajućoj otopini. Nastaju dvije faze, pri čemu je prva vodena faza, a druga organska faza. Upravo tijekom vodene faze dolazi do ekstrakcije RNK uz pomoć taloženja etanola.

Druge metode za ekstrakciju RNA razlikuju se, ovisno o veličini uzorka, vrsti tkiva i o tome je li potrebna ukupna ili djelomična RNA. Za uzorke kvasca, biljaka ili životinja, potpuna RNA ili ukupna eukariotska RNA, potrebni su uzorci. Bakterije, s druge strane, zahtijevaju ukupnu prokariotsku RNA. Svaka vrsta RNA zahtijeva različitu metodu pripreme uzorka, ekstrakcije i skladištenja.

Komplikacije s ekstrakcijom RNA su česte i općenito se odnose na razgradnju RNA nakon ekstrakcije. Enzimi ribonukleaze koji su obično prisutni u uzorcima tkiva brzo razgrađuju RNA. Ako se ne koristi brzo, razgradnja RNA može učiniti uzorak beskorisnim. Kao odgovor, mnoge metode ekstrakcije RNA uključuju korake za pripremu uzoraka za skladištenje, i prije i nakon ekstrakcije, kako bi se smanjila ili usporila razgradnja RNA.