Enzimski imunosorbentni test (ELISA) je test koji se izvodi u imunološkom laboratoriju za određivanje razine proteina u biološkom uzorku. ELISA detekcija se odnosi na završni korak testa u kojem se bistra otopina ili supstrat dodaje na plastičnu ploču koja sadrži vezana antitijela obilježena enzimima. Enzim cijepa supstrat i dolazi do promjene boje. Apsorbancija svjetlosti konačne obojene otopine se zatim mjeri na ELISA čitaču ploča ili spektrofotometru.
Postoje različite vrste ELISA testova, a dva najčešća su neizravni ELISA i capture, ili sendvič, ELISA. Neizravna ELISA se koristi za otkrivanje proteina, poznatog kao antitijelo, u serumu pacijenta. Primjer neizravnog ELISA testa je test virusa humane imunodeficijencije (HIV) koji se koristi za otkrivanje antitijela protiv HIV-a. Sendvič ELISA test otkriva protein ili antigen hvatanjem između dva antitijela. Detekcija hormona humanog korionskog gonadotropina (hCG), koji je povišen tijekom trudnoće, radi se sendvič ELISA testom.
Oba testa imaju korak ELISA detekcije na kraju testa. Ovaj korak uključuje dodavanje antitijela na koje je vezana molekula enzima. Nakon dodavanja enzimom obilježenog protutijela, dodaje se bezbojna otopina koja sadrži molekulu supstrata specifičnu za taj enzim. Enzim cijepa molekulu supstrata i otopina mijenja boju ovisno o korištenoj kombinaciji. Određivanje količine antitijela ili antigena u uzorku bolesnika vrši se mjerenjem intenziteta promjene boje.
Postoji nekoliko kombinacija enzimskih supstrata dostupnih za korištenje u koraku ELISA detekcije. Najčešći enzim je peroksidaza hrena (HRP), koja između ostalih može cijepati supstratne molekule orto-fenilendiamin dihidroklorid (OPD) i tetrametilbenzidin (TMB). Cijepanje i OPD i TMB rezultira žutom bojom, a optička gustoća ili apsorpcija svjetlosti ovih supstrata mjeri se ELISA čitačem ploča. Apsorbancija svjetlosti OPD-a mjeri se na valnoj duljini od 490 nanometara (nm), dok se TMB mjeri na 450 nm.
Drugi uobičajeni enzim koji se koristi u koraku ELISA detekcije je alkalna fosfataza. Ovaj enzim se koristi sa supstratom p-nitrofenil fosfata (PNPP), a također proizvodi žutu otopinu. PNPP apsorbira svjetlost na valnoj duljini od 405 nm.
Odabir kombinacija enzimskog supstrata obično se temelji na tome koja su enzimski obilježena antitijela komercijalno dostupna, kao i koja oprema će se koristiti za mjerenje apsorpcije svjetlosti. Mnoge kombinacije dostupne za ELISA detekciju čine ELISA test vrlo svestranim. Važan je alat u ispitivanju bolesti i istraživačkim laboratorijima.