ELISA metoda je test koji se koristi u imunologiji i drugim znanstvenim područjima za otkrivanje antitijela i antigena. ELISA je skraćenica za enzimski imunosorbentni test, što se odnosi na činjenicu da se antitijela povezana s enzimima koriste za određivanje rezultata testa. ELISA metoda se u medicini koristi za otkrivanje protutijela na bolesti kao dijagnostička mjera, a uobičajena je tehnika koja se koristi u imunološkim i biokemijskim istraživanjima.
ELISA test je razvijen 1960-ih i 1970-ih kao zamjena za imunološko testiranje koje je uključivalo korištenje radioaktivnih antitijela i antigena. Rizici korištenja radioaktivnih materijala učinili su proces testiranja glomaznim nesigurnim, a pojava ELISA metode riješila je oba ova problema. Umjesto korištenja radioaktivnih materijala za određivanje rezultata testa, ELISA koristi enzime koji reagiraju s antitijelima kako bi nastali obojeni produkti. Razvoj boje u ELISA testu ukazuje na pozitivan rezultat.
Postoji nekoliko različitih vrsta ELISA testova. Najčešće korištena ELISA metoda naziva se neizravna ELISA; ovo je test antitijela koji se koristi za određivanje je li određena vrsta antitijela prisutna u uzorku iu kojoj koncentraciji. U dijagnostičkoj medicini ovaj se test koristi za otkrivanje prisutnosti antitijela na zarazne bolesti kao što su HIV, hepatitis i druge. Prisutnost antitijela na ove bolesti ukazuje da je osoba koja se testira bila izložena uzročnicima infekcije. Obično se koristi uzorak krvi pacijenta.
U ovom testu, specifični antigen protein se koristi za oblaganje mikrotitarske ploče. Ova mala plastična ploča sadrži 96 sićušnih jažica i u svakoj se jažici može provesti jedan ELISA test. Antigen koji se koristi za određeni test ovisi o vrsti antitijela koje test pokušava otkriti. Na primjer, ako se ELISA koristi za HIV test, korišteni antigen bi bio specifičan za ovaj virus.
Kako test nastavlja, male količine nepoznatog uzorka dodaju se u svaku jažicu mikrotitarske ploče, a ploča se inkubira kako bi se ostavilo vrijeme da se antitijela u uzorku vežu na antigen. Zatim se u svaku jažicu ploče dodaje protutijelo za sekundarnu detekciju. Ako uzorak sadrži bilo koju vrstu antitijela za koje se ispituje, ono će se vezati na protutijelo za sekundarnu detekciju tijekom sljedećeg razdoblja inkubacije.
Ključ ELISA metode je da je sekundarno protutijelo obilježeno određenom vrstom enzima. Korišteni enzim može promijeniti boju ispitnog uzorka kada reagira sa svojim supstratom. Stoga, ako uzorak sadrži bilo koje od antitijela za koje se testira, dodavanje supstrata u jažicu će uzrokovati njegovu promjenu boje zbog prisutnosti sekundarnog protutijela i povezanog enzima.
Postoje i druge varijacije metode ELISA, uključujući test nazvan sendvič ELISA. Ovo se koristi za otkrivanje antigena u uzorku, a ne antitijela. U ovom testu, mikrotitarska ploča je obložena standardiziranim uzorkom antitijela. Zatim se dodaje uzorak za testiranje antigena, nakon čega slijedi dodavanje sekundarnog antitijela za detekciju i njemu povezanog enzima. Kao i kod neizravne ELISA-e, stvaranje obojenog proizvoda ukazuje na pozitivan rezultat.