Northern blot hibridizacija je tehnika koja se koristi za otkrivanje razine glasničke RNA (mRNA) u uzorku i za kvantificiranje količine prisutne mRNA. Iako postoje druge moćnije tehnike, Northern blot ostaje standard zbog svoje jednostavnosti i lakoće korištenja. Northern blotting tehnika također omogućuje izravnu usporedbu više uzoraka u jednom eksperimentu.
Messenger RNA je vrsta nukleinske kiseline koja se proizvodi kada se gen ekspresira. Gen koji je uključen i funkcionalan unutar stanice transkribira se u mRNA. mRNA se zatim transportira u citoplazmu stanice, gdje se prevodi u protein. Northern blot analiza uzorka stanične mRNA stoga može pružiti korisne informacije o nizu proteina koje stanica proizvodi.
Kod Northern blota, mRNA se ekstrahira iz stanica i prolazi kroz elektroforezu denaturirajućeg agaroznog gela, što omogućuje odvajanje mRNA u uzorku prema veličini. Uzorci mRNA molekula poznatih veličina rade se u isto vrijeme kako bi se osigurala kontrola. Kada se elektroforeza završi, uzorci se prenose i imobiliziraju na čvrstu membranu, obično izrađenu od materijala kao što je najlon. Uzorci su zatim izloženi radioaktivno obilježenim sondama nekoliko sati prije analize. Tijekom analize, mRNA koja se hibridizirala s radioaktivno obilježenom sondom može se jasno detektirati pomoću rendgenskog zraka.
Northern blotting tehnika omogućuje promatranje obrazaca ekspresije gena između različitih tipova tkiva. Messenger RNA ekstrahirana iz stanica različitih različitih tkiva i tipova organa može se usporediti, a stanični odgovori na stres, infekciju i mnoge druge podražaje mogu se ispitati. Gledajući razlike u ekspresiji mRNA u različitim uvjetima, znanstvenik može odrediti koje vrste proteina stanica proizvodi kao odgovor na određene podražaje. To može dati naznake o funkcijama nepoznatih proteina, ili u slučaju poznatih proteina, informacije o staničnim odgovorima na dotični podražaj.
Na primjer, Northern blot može pokazati da se ekspresija nepoznatog proteina povećava kao odgovor na prisutnost specifičnog toksina. Tada bi se moglo pretpostaviti da je protein uključen u smanjenje toksičnosti, možda transportom kemikalije iz stanice ili pretvaranjem u metabolit. Ako su poznati proteini pod ispitivanjem, dokumentiranje promjena u ekspresiji proteina može pružiti informacije o samom odgovoru. Ako je ekspresija poznatog molekularnog transportera povećana, na primjer, moglo bi se potvrditi da je stanični odgovor na toksin transport toksina iz stanice.