Ubikvitinacija se odnosi na vezanje proteina ubikvitina na druge proteine pomoću tri različita enzima. Ubikvitinacijski test je test koji određuje koliko se ovog procesa događa unutar stanice. Testovi se mogu koristiti za određivanje kako različiti uvjeti utječu na vezanje proteina, korake i strukture koje su važne u putu ubikvitinacije i količinu proteina u stanici. Nedovoljne ili prevelike količine povezane su s razvojem mnogih različitih bolesti.
Protein koji se nalazi u stanicama, funkcija ubikvitina je da se veže na proteine dok funkcionira kao “oznaka” ili signal drugim strukturama. Ova “oznaka” zatim signalizira enzimima da znaju da se protein može uništiti, reciklirati ili premjestiti. Rezultat je uništavanje ili transport proteina.
Ovi proteini za označavanje važni su za popravak DNK, virusne infekcije i imunološki odgovor. Druge važne funkcije uključuju uloge u staničnoj smrti, staničnu diobu i razvoj stanica. Previše ubikvitina, ili njegov nedostatak, može igrati ulogu u nastanku mnogih bolesti, kao što su rak, genetski poremećaji i bolesti imunološkog sustava.
Istraživači će koristiti test ubikvitinacije kako bi pokušali odrediti koji uvjeti mijenjaju koncentraciju proteina u stanici i uspoređujući oboljele stanice sa zdravim stanicama. Znanstvenici ga također koriste kako bi istražili koji će uvjeti uzrokovati promjene u vezivanju. Osim toga, oni mogu pokušati povezati specifični DNK kod s količinom enzima u stanici.
Postoji više od jedne vrste testa ubikvitinacije koji znanstvenici posebno koriste. Odredit će se postotak proteina koji su povezani s ubikvintinom. Drugi ispituje aktivnost enzima ili prisutnost bilo kojeg drugog međuprodukta koji se nalazi u putu ubikvinacije. Razvijeni su različiti testovi na temelju ciljanog proteina na koji će se vezati ubikvitin.
Temelj testa ubikvitinacije je uključivanje spoja koji je obilježen upotrebom druge lako mjerljive kemikalije. U onkološkim testovima, ubikvitin se može označiti kriptatom, spojem koji sadrži dva atoma dušika. To se može koristiti za određivanje koji je enzim najaktivniji u stanici.
Test ubikvitinacije imat će dva koraka. Prvi je enzimski korak u kojem će enzimi vezati obilježeni ubikvitin na ciljni protein. Drugi je korak detekcije u kojem se ispituje vezanje ciljnog proteina korištenjem konjugata kao što je antitijelo. Protutijelo će fluorescirati ili promijeniti boju, što zatim omogućuje istraživaču da odredi aktivnost enzima.