Što je Western Blot?

Western blot je tehnika laboratorijske analize koja se koristi za izolaciju proteina. Može se koristiti u dijagnostici određenih bolesti, a također i u istraživanju različitih proteina i procesa. Poznato je da je western blot povezan s dijagnozom HIV infekcije, ali se također može koristiti za traženje tragova goveđeg spongiformnog encefalitisa (BSE) i lajmske bolesti. Uzorci poslani na testiranje western blot protokolom mogu dati rezultate za nekoliko dana do nekoliko tjedana, ovisno o kapacitetu laboratorija i hitnosti.

U western blotu uzorak, koji može biti iz krvi ili tkiva, prvo se prolazi elektroforezom kako bi se proteini odvojili po dužini. Traka gela za elektroforezu s izoliranim proteinima ciljne duljine može se koristiti za prijenos proteina na nitrocelulozni supstrat za sljedeću fazu ispitivanja. Tijekom ove faze, antitijelo se unosi u uzorak, s ciljem označavanja proteina antigenima na koje se to protutijelo zaključava.

Nakon što su proteini označeni, mogu se lako identificirati. U slučaju testiranja na bolest, prisutnost reaktivnog proteina ukazuje da je uzorak pozitivan. Western blotovi rijetko vraćaju lažne pozitivne rezultate, iako se to ponekad može dogoditi, a mogu vratiti i lažno negativne, u kojima osoba zapravo ima bolest, ali to se ne pokazuje na western blot testiranju. To može biti osobito često u slučajevima kada se uzročnik bolesti još nije počeo razmnožavati.

Istraživači mogu upotrijebiti rezultate za identifikaciju specifičnih proteina koje prate i za razne druge svrhe. Razumijevanje funkcioniranja western blot protokola važna je vještina za neke istraživače i laboratorijske tehničare, jer moraju biti u stanju vratiti pouzdane i pouzdane rezultate koristeći ovu metodu. Laboratorijske vještine uključujući učenje kako rukovati kompliciranim ili lošim uzorcima i kako izbjeći kontaminaciju tijekom procesa kako bi se znalo da su rezultati testa istiniti.

Ova tehnika je ponekad poznata kao imunoblot, jer su u suštini željeni proteini “umazani” antitijelima tako da će se pojaviti. Ovaj se test može koristiti za traženje proteina kod svih životinja, ne samo kod ljudi, a veterinari često koriste western blot test kako bi utvrdili je li stado krava zaraženo ili izloženo BSE-u.