Protutijelo konjugirano s fluorescein izotiocijanatom (FITC) je fluorescentni molekularni marker visoko specifičan ili za određeni protein ili za primarno protutijelo. Koriste se za identifikaciju proteina u imunocitokemiji, testovima aktivnosti enzima i proteina, protočnoj citometriji i Western blottingu. Većina FITC antitijela može se kupiti preko specijaliziranih tvrtki za molekularnu biologiju ili napraviti u pojedinačnim istraživačkim laboratorijima.
FITC je fluorokrom često konjugiran ili povezan s protutijelom kako bi se napravio specifičan, fluorescentni marker. Kada su izloženi elektromagnetskoj energiji na određenoj valnoj duljini, fluorokromi su kemikalije koje će apsorbirati energiju i emitirati foton na određenoj valnoj duljini. FITC apsorbira energiju na 495 nm i emitira foton na 521 nm. Svaki fluorokrom ima različit raspon apsorpcije i emisije, što omogućuje sustavno otkrivanje mnogih antitijela povezanih s fluorkromom u jednom komadu tkiva ili uzorku. To je slično označavanju različitih dijelova ćelije različitim bojama, a zatim korištenjem specijaliziranih naočala za gledanje samo jedne boje u isto vrijeme.
Antitijela se mogu povezati ili konjugirati s FITC molekulom kako bi se proizvelo FITC antitijelo. Ovo FITC antitijelo može se koristiti za izravno ili neizravno obilježavanje proteina. Kada FITC protutijelo izravno označi protein, ono djeluje kao primarno antitijelo ili antitijelo u izravnom kontaktu s antigenom. Neizravna uporaba FITC protutijela događa se kada se ono koristi kao sekundarno protutijelo, vezano specifično za primarno protutijelo. Kada se FITC konjugirano protutijelo koristi izravno, postupak označavanja traje manje vremena, ali označavanje nije tako snažno. Neizravno označavanje zahtijeva dodatni korak, ali signal ili oznaka se pojačavaju jer se nekoliko FITC-označenih sekundarnih protutijela može vezati na jedno primarno protutijelo.
Postoje mnoge primjene FITC protutijela u staničnoj i molekularnoj biologiji. Ova vrsta protutijela može se koristiti samostalno ili u kombinaciji s drugim monoklonskim ili poliklonskim antitijelima za označavanje specifičnih proteina unutar stanica tehnikom poznatom kao imunocitokemija. FITC antitijela se također mogu koristiti u tehnikama kao što su testovi aktivnosti enzima i proteina, protočna citometrija i Western blotting.
FITC konjugirana primarna i sekundarna protutijela široko su dostupna kroz mnoge tvrtke za molekularnu biologiju. Također je moguće da laboratoriji pripreme vlastita primarna antitijela, a zatim koriste komplet za konjugaciju FITC-a s njima. Neke tvrtke će uzeti laboratorijski pripremljena primarna antitijela i konjugirati ih s FITC fluorokromom za laboratorij. FITC-konjugirana sekundarna protutijela obično se ne proizvode u pojedinačnim istraživačkim laboratorijima i obično se kupuju od tvrtki specijaliziranih za proizvodnju sekundarnih protutijela.